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작성일 : 16-09-09 08:58
Rotifer Culture Protocol 2
 글쓴이 : 운영자
조회 : 1,159  
< Rotifer Culture Protocol 2>

※ 유의사항
   ① 배양할 모종의 rotifer 수가 적을 경우, 회수하는 rotifer 수도 적어진다.
   ② 같은 용량의 CH(chlorella)를 구매할지라도, CH의 농도는 다를 수 있으므로 유의한다.


1. Material
  - 살아있는 rotifer (모종)
  - Rotifer food로 사용될 CH (대상담수농축 Chlorella)
  - Rotifer 사육을 위한 1L, 2L 플라스틱 병
  - 히터(28도 유지)
  - 폭기(tubing, air stone, air pump)
  - Rotifer 수거할 때, 사용할 mesh(#350)
  - 2 culture solution: KW05(5ppt sea salt/RO), KW10(10ppt sea salt/RO)

2. Condition
  - 수온 28도 유지, 폭기

3. Time table
  ① 00 dpi
     [아침] ⅰ) inoculation & feeding
          A ◀ C(모종) 400mL + KW05 1200mL ▶ feeding CH 1.0mL
          B ◀ C(모종) 200mL + KW05 600mL  ▶ feeding CH 0.5mL
          C ◀ C(모종) 200mL + KW10 600mL  ▶ feeding CH 0.5mL
          ★ C(모종) ≒ 1,500ea/mL
              ⅱ) 6mm tubing에 air stone 1개를 끼운 후, 플라스틱 병에 넣는다.
              ⅲ) 폭기(aeration)
                          

     [저녁] feeding
          A : green color ▶ feeding CH 0.8mL (대략)
          B : green color ▶ feeding CH 0.3mL (대략)
          C : green color ▶ feeding CH 0.3mL (대략)
    ★ 실험실 내 rotifer 사용량에 따라, 배양용기의 용량을 늘려도 되지만, C(모종, 나중에 배양할 rotifer)의 용량이
        클수록 수질이 빨리 악화되므로, C(모종)는 큰 용기를 사용하지 않도록 한다. ★
                  
  ② 01 dpi
     [아침] Photos & feeding
          A : green + brown color(녹갈색) ▶ feeding CH 1.0mL
          B : green + brown color(녹갈색) ▶ feeding CH 0.5mL
          C : green + brown color(녹갈색) ▶ feeding CH 0.5mL
                           
 
     [저녁] feeding
          A : green > brown color ▶ feeding CH 1.0mL
          B : green > brown color ▶ feeding CH 0.5mL
          C : green > brown color ▶ feeding CH 0.5mL




  ③ 02 dpi
     [아침] Photos & feeding
          A : brown color ▶ feeding CH 1.0mL
          B : brown color ▶ feeding CH 0.5mL
          C : brown color ▶ feeding CH 0.5mL
     [저녁] feeding
          A : green > brown color ▶ feeding CH 1.0mL
          B : green > brown color ▶ feeding CH 0.5mL
          C : green > brown color ▶ feeding CH 0.5mL




 ④ 03 dpi
     [아침] Photos & recovery
          A : brown color ▶ recovery
          B : brown color ▶ recovery
          C : brown color ▶ inoculate to A‘, B’, C‘




4. Recovery 방법
  [아침에 recovery]
  배양한지 3일째 된 rotifer recovery
     A, B : #350(Fig. B)를 사용하여 recovery 후, zebrafish에게 급여. recovery 할 때, 침전물이 많이 들어가지
              않도록 한다. recovery 한 rotifer는 반드시 하루에 모두 소비.
     C : inoculate to A‘, B’, C‘

                     

※ 유의사항
① rotifer를 급여한 fry는 반드시 (1pp sea salt/RO)에서 사육한다.

※ Tip

① 아침에 CH를 급여한 후, 저녁에 brown color로 변화하는 지 확인한다. brown color는 rotifer가 잘 증식하고 있다는 의미임과 동시에 CH가 많이 소비되었다는 의미이다. color의 변화정도를 확인하며 일일 급여량을 결정한다.
② 아침에 CH를 급여한 후, 저녁이 되었는 데도, color 변화가 없다면 배양에 문제가 있는 것으로 볼 수 있다.
③ rotifer의 배양정도에 따라 CH 급여량이 달라질 수 있다. 즉, 초기 set-up 당시 CH 급여량과 이후 급여량이 달라질
    수 있다.
④ 접종 후 3일 후에 recovery 한다. 3일 이후부터는 water quality가 급격히 나빠져, rotifer 양이 급격히 감소하거나
    죽는다.
⑤ CH 보관 또는 급여 시, CH의 색상이 green → brown으로 변했다면 사용하지 말고, 폐기한다.
⑥ Set-up 시, 하루 2회 정도는 rotifer를 1ml 채취하여 현미경으로 관찰해본다.
    1. 움직임 : 활발히 움직일수록 좋은 상태
    2. 배양액이 brown color 일 때, 침전물 확인 : 깨끗한 brown color일 때, 침전물이 거의 없음.
    3. 알 갯수 : 배양 조건이 좋으면, 3~4개 정도의 알을 달고 있는 rotifer 관찰 가능