Áö³ë¹ÍµðÀÚÀÎ
 
 
ÀÛ¼ºÀÏ : 15-08-08 19:40
Zebrafish genomic DNA PCR¿¡ ´ëÇؼ­ ±Ã±ÝÇÑ Á¡ÀÌ ÀÖ½À´Ï´Ù.
 ±Û¾´ÀÌ : ³ëµ¿Çõ
Á¶È¸ : 14,748  

¾È³çÇϽʴϱî?


Àú¹ø¿¡ º¸³»ÁֽŠDNA extraction protocolÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ½ÇÇèÀ» ÁøÇà ÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú½À´Ï´Ù.
ÀÌ¿¡ ´Ù½ÃÇѹø °¨»ç µå¸³´Ï´Ù.

´Ù¸§ÀÌ ¾Æ´Ï°í, PCRÀ» ÁøÇàÇÔ¿¡ À־ ¿äÁò ½ÇÇè ÁøÇàÀÌ Àß µÇÁö ¾Ê¾Æ¼­ Áú¹® µå¸³´Ï´Ù.

DNA extractionÀ» ÇÑ ÈÄ, ³óµµ¸¦ ÀçÁö ¾Ê°í PCRÀ» ÁøÇà Çß¾ú½À´Ï´Ù.
Çåµ¥ ¿ä»õ PCRÀÌ µÇÁö¾Ê¾Æ¼­ ³óµµ°¡ ³Ê¹« ÁøÇÑ °Í °°¾Æ¼­ Lysis buffer¸¦ °¡Áö°í Èñ¼®À» ÇÏ¿´½À´Ï´Ù. 

±× ÈÄ ³óµµ¸¦ À纸´Ï, °¢ Sample´ç 
37.61 ng/ul  260/280 = 0.52
21.19 ng/ul  260/280 = 4.52
19.44 ng/ul  260/280 = 2.51
30.69 ng/ul  260/280 = 33.1

ÀÌ·¸°Ô ³ª¿Ô½À´Ï´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ SampleµéÀ» °¡Áö°í 

DW 9 ul
Taq buffer 5 ul
Template 2 ul
primer F,R °¢ °¢ 1 ul (10 pmol)
dNTP 1 ul (2.5 mM each)
Taq 1 ul (2.5 unit/ul)

·Î ÃÑ 20 ulÀÇ PCR product¸¦ °¡Áö°í ½ÇÇèÇÏ¿´½À´Ï´Ù.

PCR conditionÀ¸·Î´Â 

Cycle number         Denature             Anneal                Extend
       X 1             94¡É, 5min
       X 30            94¡É, 30s            54¡É, 30s              72¡É, 30s
       X 1                                                            72¡É, 5 min

ÀÔ´Ï´Ù. 
°¢ primerÀÇ Tm°ªÀº 58.7 ¡É, 50.9 ¡É ÀÔ´Ï´Ù.

ÀÌ·¸°Ô PCRÀ» ÇÏ¿´´õ´Ï °á°ú°¡ ÀÌ·¸°Ô ³ª¿Ô½À´Ï´Ù. (°á°ú´Â ÆÄÀÏ Ã·ºÎ·Î ÇÏ°Ú½À´Ï´Ù)
¹«¾ùÀÌ ¹®Á¦¿©¼­ PCRÀÌ ÁøÇàµÇÁö ¾Ê´Â °ÍÀϱî¿ä? Á¶½É½º·¹ Áú¹® µå·Áº¾´Ï´Ù.

±ä ±Û ÀоîÁּż­ °¨»çÇÕ´Ï´Ù. 

³ëµ¿Çõ 15-08-08 19:54
 
¾Æ ¿øÇÏ´Â target DNAÀÇ Å©±â´Â 290 bp ÀÔ´Ï´Ù.